Выявление неуказанных источников животного происхождения в сухих кормах для собак, используемых в качестве элиминационных диет

Special Issue: Proceedings of the 15th Congress of the ESVCN, 14 – 16 September 2011, Zaragoza, Spain

Volume 97, Issue Supplement s1, pages 32–38, May 2013

Перевод с англ.: ветеринар - невролог/кардиолог Васильев

Недостаточный ответ на применение коммерческих диет с ограниченными источниками антигенов наблюдается у собак, получающих элиминационную диету для диагностики побочных пищевых реакций (AFR). Целью этого исследования было оценить 12 сухих диет для собак с ограниченными источниками антигенов (11 диет с новым источником протеина и 1 гидролизованная диета) на потенциальную контаминацию ингредиентами животного происхождения, не указанными на упаковке. Также оценивалась ценность двух методов, применяемых для выявления таких антигенов. Каждый диетический продукт анализировался при помощи микроскопического анализа, с использованием официального метода, описанного в постановлении Комиссии ЕС 152/2009, с целью идентификации костных фрагментов различных зоологических классов ( млекопитающие, птицы и рыбы) и полимеразной цепной реакции (PCR) для идентификации ДНК животного происхождения. Были найдены расхождения между результатами, полученными с помощью PCR , микроскопическим анализом и ингредиентами, перечисленными на упаковке корма.

 

Только в двух кормах для собак, результаты обоих анализов соответствовали ингредиентам, перечисленным на упаковке. В оставшихся 10 образцах микроскопически выявленные фрагменты из одного или двух неожиданных зоологических классов, с обнаружением костных фрагментов птиц в 6 из 10 образцов, рыбы в 5 из 10 и фрагментов млекопитающих в 4 из 10.В 2 образцах микроскопический анализ выявил контаминацию. В 2 образцах микроскопический анализ выявил контаминацию, которая могла пройти незамеченной, если бы не использовался метод PCR. Однако, PCR подтвердил наличие всех зоологических классов, выявленных при помощи микроскопического анализа, а также идентифицировал ДНК дополнительных неожиданных зоологических классов в 2 образцах. Собаки могли недостаточно отвечать на коммерческие диеты с ограниченными источниками антигенов, поскольку такие диеты были контаминированы потенциальными аллергенами. Как PCR, так и микроскопический анализ требуются, для того, чтобы гарантировать отсутствие неуказанных  животных источников в кормах для собак. До исключения AFR, должна быть рассмотрена домашняя диета с новым источником протеина, если собака не отвечает на кормление коммерческим кормом для диагностики AFR.

В последнее десятилетие диеты с ограниченными источниками антигенов получили значительное распостранение для применения с целью диагностики побочных пищевых реакций (AFR) и контролирования относящихся к ним симптомам. Золотым стандартом диагностики AFR является кормление животных диетой с ограниченными источниками животных антигенов до улучшения клинических симптомов, а затем повторное введение диеты, которой животное ранее питалось, с целью демонстрации рецидива симптомов. Целью диет с ограниченными источниками антигенов является избегание контакта животных с потенциальными аллергенами в течение 8-10 недельного элиминационного периода.

 

Эти диеты могут быть как домашнего приготовления, так и коммерческими. Оба вида типично содержат один источник белка ( новый диетический протеин) и один источник углеводов, которые обычно не содержатся в поддерживающих диетах и, поэтому, имеется меньше вероятности, что животное когда либо имело контакты с ними. Диеты с гидролизированным белком являются диетами с ограниченными источниками антигенов, они представляют собой реальную альтернативу диетам с новым источником протеинов, поскольку они содержать фрагменты протеинов весом <10 kDa, которые придают более высокую усвояемость и более низкую аллергенность корму. Если в период кормления элиминационной диетой не наблюдается клинического улучшения, AFR исключается и могут подозреваться другие заболевания, такие как атопический дерматит или зудящие неаллергенные заболевания.

 

Выбор корректной коммерческой диеты с ограниченными источниками антигенов является очень важным шагом в диагностировании AFR собак и начинается со сбора точной истории кормления от владельцев, которые сообщают ингредиенты, которые собака ранее употребляла. Поэтому, внимательное прочтение перечня ингредиентов на упаковке имеет первостепенную важность для избежания контакта с потенциальными аллергенами.Диета не должна содержать какие либо ингредиенты, упомянутые владельцами ранее.

 

Элиминационная диета остается единственным эффективным способом постановки точного диагноза AFR, поскольку кожные и серологические тесты, биопсия кожи и гастроскопические тесты на выявление гиперчувствительности к пище продемонстрировали свою неадекватность для постановки диагноза.

 

Хотя большинство ветеринаров рассматривают диеты домашнего приготовления как лучший выбор при назначении элиминационной диеты, многие владельцы предпочитают удобство коммерческих диет, и, по этой причине, в нескольких исследованиях оценивалась эффективность коммерческих диет с ограниченными источниками антигенов в диагностике AFR. Одни авторы пришли к выводу, что коммерческие диеты с ограниченными источниками антигенов подходять для долговременного лечения зуда, вызванного AFR; другие показали, что они не могут заменить диету домашнего приготовления при диагностировании пищевой гиперчувствительности и контроле клинических симптомов.

 

Интересно отметить, что определенные источники протеинов больше не рассматриваются как новые; для примера, белок рыбы широко используется как диетический компонент в поддерживающих диетах, и,вследствие этого,у некоторых собак развилась гиперчувствительность к нему Новизна специфических протеинов не является, поэтому, абсолютной и должна всякий раз оцениваться при назначении элиминационной диеты. Хотя гидролизованные диеты протестированы, их эффективность признается не всеми.

Tapp и коллеги в своем исследовании подчеркивают, что использование коммерческих диет с ограниченными источниками антигенов обеспечивает лучшее взаимодействие с владельцами, чем использование диет домашнего приготовления, что является важным компонентом, принимаемым в рассмотрение для постановки точного диагноза, но, хотя недостаточный ответ на антигены коммерческих диет может встречаться, это не исключает однозначно AFR.

 

По этой причине, даже когда собаки не демонстрируют очевидное улучшение клинических симптомов в течение курса элиминационной диеты, относящиеся к диете факторы не могут быть исключены, как играющие роль в пролонгировании воспаления кожи и зуда. Этот недостаточный эффект лечения может встречаться из - за того, что ветеринар некорректно выбрал диету на основании перечня ингредиентов, остаточных аллергенных фрагментов в гидролизованной диете или контаминации, которая встречается в течение процесса производства диеты с ограниченными источниками антигенов. Во всех этих случаях, постановка точного диагноза AFR будет поставлена под угрозу.

 

В этом исследовании, авторы использовали коммерческие корма для собак, используемые для элиминационной диеты с целью выявления наличия источников животного происхождения, неуказанных на упаковке, которые эквивалентны контаминации. Дополнительной целью было оценить достоверность методов, применяемых для выявления пищевых антигенов.

Табл 1 показывает источники белка и жира животного происхождения, указанные на упаковках 12 образцов диет для собак. Также указаны ожидаемые результаты и те, которые получены с помощью микроскопии и PCR и описаны как зоологические классы (A, F и M). Информация об ожидаемых зоологических классах была взята из перечня ингредиентов и если на упаковке указывался термин «животные жиры», рассматривались как класс млекопитающих, так и класс птиц.

 

 

nd = невыявленные фрагменты костей

 

Наблюдались несоответствия между ожидаемыми результатами и результатами, полученными при помощи PCR и результатов микроскопии. Только в 2 кормах для животных (образцы 11 и 12) результаты обоих анализов показали наличие ингредиентов, указанных  на упаковке. Диета 11, единственнная гидролизованная диета, рассмотренная в этом исследовании, содержала гидролизованную сою, как основной источник протеина;животные жиры, гидролизованная печень цыпленка и рыбий жир также были указаны на упаковке. PCRясно показал наличие ДНК всех зоологических классов (млекопитающие, птицы, рыбы), в то время как костные фрагменты не были идентифицированы световой микроскопией, как ожидалось. В диете 12 рыбная мука была указана как единственный ингредиент животного происхождения и это было подтверждено как PCR, так и микроскопическим анализом.

 

Среди остающихся 10 образцов микроскопический анализ выявил костные фрагменты, принадлежащие к одному неожиданному зоологическому классу в 5 видах кормов, в то время как костные фрагменты из 2 неожиданных зоологических классов были идентифицированы в других 5 кормах. Фрагменты костей птиц были наиболее типичны и были выявлены в 6 из 10 образцов; фрагменты млекопитающих были представлены в 4 образцах, в то время как фрагменты рыб были найдены в 5 образцах.

 

Результаты анализов PCR проб 9 и 10 выявили ДНК всех зоологических классов: рыбы, птицы и млекопитающие. Этот результат был предсказуем, поскольку жир животных и рыб был указан на упаковке корма 9, а рыба, рыбий жир, гидролизованная печень цыпленка и жир животных были указаны на упаковке корма 10. В корме 9, однако, микроскопией были идентифицированы не только костные фрагменты рыб, как ожидалось, а также были найдены фрагменты млекопитающих и птиц. Схоже с этим, непредусмотренные фрагменты костей млекопитающих были выявлены в корме10.

В остающихся 8 образцах (1-8), PCRподтвердила наличие всех зоологических классов, выявленных микроскопией. Более того, ДНК птиц и млекопитающих были также выявлены в образцах 3 и 9, соответственно

 

Два фактора играют основную роль в эффективности проведения элиминационной диеты: согласие владельцев, поскольку им рекомендуется не кормить собаку ничем другим, кроме рекомендованной диеты (до 8-10 недель), и адекватность рекомендованной диеты.

Когда во время проведения диеты не наблюдается улучшения клинических симптомов, причиной этого могут быть другие аллергические или неаллергические заболевания. Малейшее невыполнение собакой или владельцем должно оперативно оцениваться, имея при этом в виду, что сама по себе диета может препятствовать улучшению клинических симптомов.

 

При этом мы предполагаем, что диагностика инфестации паразитами и бактериальными и/или грибковыми инфекциями уже проведена и они исключены ко времени проведения диеты.

 

1 Атопический дерматит

2 Неаллергическое заболевание с зудом

3 Недостаточное взаимодействие с владельцем животного

4 Ненадежность выбранной диеты

5 Остаточные аллергенные фрагменты в гидролизованной диете

6 Несоответствующий выбор диеты с ограниченными источниками антигенов на основании перечня компонентов

 

Хотя продемонстрировано, что понимание клиента и взаимодействие с ветеринаром может быть значительно улучшено за счет подхода, который включает акцентирование важности строгого подхода во время проведения элиминационной диеты, адекватность диеты с ограниченными источниками антигенов зависит от производителя корма для собак. Это означает, что если ветеринар выбирает диету с ограниченными источниками антигенов, на основании внимального сбора истории предшествующего кормления и изучения перечня ингредиентов, полное соответствие между ингредиентами в перечне и теми, которые реально включены в состав корма, должно быть гарантировано производителем корма.

 

Biourgeс коллегами предположил, что использование нескольких диет с ограниченными источниками антигенов может потребоваться в случае, если собака не отвечает на элиминационную диету. Мы считаем, что это занимает слишком много времени, а также может ухудшить сотрудничество с владельцем. Наоборот, надежность элиминационной ди еты должна быть гарантирована, чтобы избежать потери времени.

Принимая это во внимание, 12 коммерческих диет с ограниченными источниками антигенов (11 диет с новым источником протеина и одна гидролизованная диета) были оценены в этом исследовании на потенциальную контаминацию ингредиентами животного происхождения, не указанными на упаковке. Авторы предположили, что такое присутствие может быть ответственным за недостаточное улучшение клинических симптомов в течение курса элиминационной диеты и неэффективность диагностирования AFR собак.

 

Полученные результаты показали, что 10 из 12 выбранных коммерческих сухих диет с ограниченными источниками антигенов были неподходящими для использования в качестве элиминационной диеты, поскольку они содержали ингредиенты, принадлежащие к одной или двум зоологическим классам (млекопитающие, птицы и рыба), не указанным на упаковке.

Источники животного происхождения в образцах были выявлены при помощи как микроскопического анализа для идентификации костных фрагментов в пище, так и PCR анализа для выявления ДНК бескостных ингредиентов, таких как животные жиры, рыбий жир и гидролизованная печень цыпленка, которые не обнаруживаются при микроскопии.

В нашем исследовании все 10 образцов были положительными при микроскопическом исследовании, и это показывает, что непредвиденные источники, наиболее вероятно ,были животного происхождения, что подтверждает нашу гипотезу о контаминации кормов для домашних животных.

 

Ингредиенты кормов для собак обычно являются побочными продуктами переработки мяса, птицы и рыб. Когда животных убивают, мышечная ткань и некоторые органы используются для питания людей, в то время как оставшиеся части туши(побочные продукты) используют в кормах для домашних животных. Побочные продукты подвергаются специальному термическому процессу, называемому рендеринг, который отделяет жир от костей и постных частей, чтобы получить мясной компонент и мясокостный компонент, которые являются основным источником животных протеинов в сухих кормах для домашних животных.

 

Стоить отметить, что авторы рассматривают не только белок, но и источники жиров животного происхождения как потенциальные аллергены, поскольку у людей наблюдались случаи аллергии после  потребления растительных масел или животных жиров вследствие наличия остаточных протеинов после процесса экстракции. Поэтому, нельзя исключить, что это может случиться также в течение рендеринга животных продуктов.

 

Наши результаты продемонстрировали, что оба аналитических метода, микроскопия и PCR анализ должны выполняться при исследовании каждой пробы, для того, чтобы исключить любую контаминацию, поскольку они снабжают различной информацией в равной степени требуемой для полной оценки безопасности продукта. Пример - выявленные  с помощью PCR ДНК птицы в образце 3 и ДНК   млекопитающих в образце 7, чьи костные фрагменты не были выявлены микроскопическим анализом.ДНК, характерная для зоологического класса, выявленная при помощи PCR,показывает наличие любой органической ткани, такой как жир, кровь, субпродукты и перья, которые как и , питание животным кормом потенциально могут быть аллергичны. Какие точно животные протеины вызывают AFR, фактически, пока является полем для дискуссий, и, поэтому, любая часть «запрещенного» вида животных должна рассматриваться потенциально аллергичной и ее потребление запрещается во время проведения элиминационной диеты.

 

Благодаря их высокой специфичности, чувствительности и быстроты, методы PCR все чаще используются для выявления аллергических компонентов пищи у людей. Должно взято во внимание также то,что пищевые продукты обычно имеют сложный состав, а некоторые их составные части ( напр. соли, протеины, липиды) являются потенциальными ингибиторами амплификации ДНК во время проведения PCR. Далее, ДНК является только  маркером потенциально аллергичной пищи, поскольку не гарантирует наличие аллергенных протеинов. По этой причине, авторы нашли,что более полезно не  использовать PCR как единственный метод выявления аллергенов пищи в собранных образцах и микроскопический анализ должен всегда выполняться одновременно.

 

Расхождения, наблюдаемые между результатами ожидаемыми и теми, которые получены как при помощи PCR, так и микроскопическим анализом, вызывают сомнения относительно реальной эффективности коммерческих диет с ограниченными источниками антигенов и диетами с новыми протеинами, в частности, при диагностике AFR.

 

Хотя несколько исследований сфокусировалось на клинической эффективности различных коммерческих диет, используемых при проведении элиминационного тестирования; лишь немногие рассматривают их  диетические характеристики ценными для проведения элиминационного теста. Представленные здесь результаты согласуются с теми, которые представил недавно Raditic с коллегами, который нашел, что 3 из 4 выбранных сухих кормов для собак  с олениной, используемых для выполнения элиминационного тестирования были позитивны в тесте ELISA на наличие сои и одна на говядину, причем ни соя, ни говядина не были указаны на упаковке в перечне ингредиентов. Это исследование не могло дать ответ на вопрос, есть ли в корме мясо птицы, поскольку тест ELISA ненадежен в определении наличия мяса птиц в корме. В нашем исследовании, зоологический класс птиц был наиболе часто встречающимся источником контаминации в 10 протестированных кормах для домашних животных, протестированных на наличие непредсказуемых животных источников.

 

Обнаружение в коммерческих диетах с ограниченными источниками антигенов ингредиентов, неуказанных  на упаковке обескураживает, поскольку кормление собак, реально имеющих пищевую гиперчувствительность продуктами, непредсказуемо контаминированными потенциально аллергичными протеинами может исключить значимую ремиссию симптомов и ввести в заблуждение клинициста при диагностировании AFR.

 

Наблюдение, что более чем 80% выбранных диет были контаминированы, означает, что риск отсутствия положительной динамики при проведении элиминационной диеты является высоким и это поднимает вопросы, относительно диагностической значимости используемых продуктов. Предыдущее исследование (Ricciс коллегами., 2009) показало, что коммерческие диеты с ограниченными источниками антигенов содержат значительно большее количество  омега-3 жирных кислот, чем обычные поддерживающие диеты. Рассматривая противовоспалительный потенциал  омега -3 жирных кислот, описанный Scottи Miller (1993), Ricciс коллегами предположил, что он является причиной частичного улучшения клинических симптомов ( напр, зуда), после кормления элиминационной диетой, а также одной из причин некорректной диагностики AFR. Различные гипотезы могут обьяснить контаминацию, наблюдаемую в большинстве выбранных диет для домашних животных, такие как неадекватная очистка линии производства продуктов и несоответствующее хранение и/или транспортировка сырых материалов.

 

Результаты нашего исследования говорят о том, что кормление собак коммерческими диетами с ограниченным количеством антигенов может не предотвращать их от потребления потенциальных аллергенов.

 Полученные данные, что только  тестированная гидролизованная диета  свободна от неожиданных ингредиентов, не позволяют сделать обобщенные выводы по адекватности гидролизованных диет по отношению к диетам с новым источником протеина, во -первых, поскольку малое количество других гидролизованных диет, доступных в маркетах, протестировано и, во- вторых, поскольку это не было целью нашего исследования.

 

Мы, поэтому, советуем производителям уделять больше внимания всей технологической линии обработки, для того, чтобы избегать риска контаминации диетических продуктов, используемых при проведении элиминацинной диеты. Кроме того, обязательное официальное контролирование с использованием PCR и микроскопического анализа должны проводиться для каждого пакета, для того, чтобы гарантировать отсутствие незадекларированных животных источников. Видоспецифичный PCR анализ должен также использоваться в будущем для определения видов животных, и не только  ассоциированных зоологических классов, вовлеченных в контаминацию. Количественный анализ костных фрагментов должен рассматриваться для оценки выраженности контаминации.

 

Число аллергенных белков, способных вызывать симптомы у собак и кошек, неизвестно, в то время как нужно помнить, что пороговые уровни для специфических аллергических реакций варьируют у человека и варьируют от менее чем 1 мг до более чем 1г аллергенных протеинов, в зависимости как от пищи, так и от индивидиальной особи. Обнаружение даже следов непредвиденных животных протеинов в кормах для домашних животных, позиционированных как диеты с ограниченными источниками аллергенов неприемлемо, вследствие риска несостоятельности диагностического исследования.

 

В заключение, использование 10 из 12 кормов для домашних животных, протестированных в настоящем исследовании в качестве диет с ограниченными источниками антигенов, может быть ненадежным для исключения диагноза AFR, и использование диеты домашнего приготовления должно рассматриваться во всех случаях, когда собака недостаточно отвечает на пищевое ограничение.